RARα/Retinoic Acid Receptor α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400529-ACT

RARA codifica o RARα, um receptor nuclear ativado por ligante que forma heterodímeros com RXRs para se ligar a elementos de resposta ao ácido retinoico e regular programas de transcrição que controlam decisões de destino celular. Por meio da sinalização por retinoides, o RARα modula o estado da cromatina e redes gênicas que governam diferenciação, proliferação e apoptose, com fortes vínculos com a maturação hematopoética e o desenvolvimento epitelial. Sua atividade se integra a vias centrais transcricionais e epigenéticas, incluindo a troca de correpressores/coativadores e a comunicação cruzada com as vias de sinalização MAPK e PI3K. A expressão ou sinalização desregulada de RARA está associada a estados de diferenciação alterados e é amplamente estudada na biologia do câncer e em modelos de doenças do desenvolvimento.

RARα/Retinoic Acid Receptor α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RARA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RARα/Retinoic Acid Receptor α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RARA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RARA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RARα/Retinoic Acid Receptor α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RARA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RARα/Retinoic Acid Receptor α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RARα/Retinoic Acid Receptor α em células tumorais com expressão de RARA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.