Plasmide CRISPR d'Activation (h) RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-400529-ACT

RARA code pour RARα, un récepteur nucléaire activé par un ligand qui forme un hétérodimère avec les RXR afin de se lier aux éléments de réponse à l’acide rétinoïque et de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Par le biais de la signalisation des rétinoïdes, RARα module l’état de la chromatine et des réseaux géniques qui gouvernent la différenciation, la prolifération et l’apoptose, avec des liens étroits avec la maturation hématopoïétique et le développement épithélial. Son activité s’intègre à des voies transcriptionnelles et épigénétiques centrales, notamment via l’échange de co‑répresseurs/co‑activateurs et des interactions (cross-talk) avec les voies MAPK et PI3K. Une expression ou une signalisation de RARA dérégulée est associée à des états de différenciation altérés et fait l’objet de nombreuses études en biologie du cancer et dans des modèles de maladies du développement.

RARα/Retinoic Acid Receptor α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RARA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RARα/Retinoic Acid Receptor α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RARA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RARA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RARα/Retinoic Acid Receptor α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RARA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RARα/Retinoic Acid Receptor α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RARα/Retinoic Acid Receptor α dans les cellules tumorales présentant une expression de RARA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.