Rac 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401157-ACT

O RAC2 codifica a Rac2, uma pequena GTPase da família Rho enriquecida em células hematopoéticas, que alterna entre os estados ligados a GDP e a GTP para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a polaridade celular e o tráfego de membranas. A Rac2 atua a jusante de sinais de imunorreceptores, integrinas e quimiocinas para regular a ativação da NADPH oxidase, a produção de espécies reativas de oxigênio e as respostas antimicrobianas dos fagócitos, além de influenciar saídas de sinalização dependentes de MAPK e PI3K. Em leucócitos, a Rac2 sustenta quimiotaxia, adesão, desgranulação e a dinâmica da sinapse imune, conectando o controle do citoesqueleto a vias inflamatórias e da imunidade inata. A atividade ou expressão desregulada de RAC2 tem sido associada a alterações na defesa do hospedeiro e na homeostase imune, tornando-o relevante para o estudo de mecanismos de imunodeficiência, fenótipos inflamatórios e sinalização celular hematológica.

Rac 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rac 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rac 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rac 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rac 2 em células tumorais com expressão de RAC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.