PTEN Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422475-ACT

O gene **Pten** do camundongo codifica a **PTEN**, uma fosfatase de lipídios e proteínas que antagoniza a sinalização de **PI3K** ao desfosforilar **PIP3**, restringindo assim a ativação da via **AKT/mTOR** e moldando programas celulares de crescimento, metabolismo e sobrevivência. A PTEN também contribui para a estabilidade do genoma, o controle do ciclo celular e a polaridade celular por meio de funções citoplasmáticas e nucleares que influenciam respostas a danos no DNA e a regulação da cromatina. A disrupção ou a expressão reduzida de PTEN está amplamente associada a uma sinalização proliferativa desregulada e a estados de diferenciação alterados em diversos tecidos, tornando-a um nó central em estudos de reprogramação de vias oncogênicas. Em modelos murinos, efeitos de dosagem de **Pten** são frequentemente usados para investigar a comunicação entre vias com receptores tirosina-quinase, a sinalização **MAPK** e sinais do microambiente imune.

PTEN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pten sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PTEN O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pten em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pten, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PTEN. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pten nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PTEN no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PTEN em células tumorais com expressão de Pten silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.