PSS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404133-ACT

O PTDSS2 humano codifica a fosfatidilserina sintase 2 (PSS2), uma enzima de membrana do retículo endoplasmático que catalisa a produção de fosfatidilserina por meio de troca de base com a fosfatidiletanolamina. Ao controlar a abundância celular de fosfatidilserina, a PSS2 ajuda a regular a biogênese de membranas, a homeostase de organelas, o tráfego vesicular e processos de sinalização dependentes de lipídios que influenciam a apoptose e a depuração fagocítica. A atividade do PTDSS2 está intimamente ligada às vias de remodelamento de fosfolipídios e à troca de lipídios entre o RE e a mitocôndria, moldando a função mitocondrial e as respostas celulares ao estresse. A desregulação do metabolismo da fosfatidilserina tem sido associada a fenótipos de crescimento e sobrevivência alterados no câncer e a defeitos de membrana mais amplos, relevantes para o metabolismo e a neurobiologia, tornando o PTDSS2 um alvo útil para estudos mecanísticos.

PSS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PTDSS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PTDSS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PTDSS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PTDSS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSS2 em células tumorais com expressão de PTDSS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.