PSR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401718-ACT

JMJD6 humano, também conhecido como PSR, codifica uma enzima que contém um domínio Jumonji C (JmjC), implicada na regulação epigenética e associada ao RNA da expressão gênica. Foi relatado que o JMJD6 catalisa a hidroxilação e a desmetilação de substratos proteicos e que participa do alongamento transcricional e do splicing do pré‑mRNA por meio de interações com BRD4 e fatores do spliceossomo. Por meio dessas atividades, o PSR contribui para o controle associado à cromatina de programas de desenvolvimento, progressão do ciclo celular e redes transcricionais responsivas ao estresse. A expressão ou atividade desregulada de JMJD6 tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em múltiplos contextos de doença, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização da cromatina e processamento de RNA.

PSR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de JMJD6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus JMJD6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição JMJD6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus JMJD6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSR em células tumorais com expressão de JMJD6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.