Plásmido CRISPR de Activación (h) Podocalyxin-like 1: sc-400317-ACT

PODXL codifica la podocalixina‑like 1, una sialomucina de la familia CD34 altamente glicosilada localizada en la superficie apical de epitelios polarizados y del endotelio vascular. A través de sus propiedades antiadhesivas y de sus interacciones con los conectores de actina NHERF/ezrina, PODXL contribuye a la forma celular, la formación de lúmenes y la regulación del equilibrio entre adhesión y motilidad, con impacto en la organización del citoesqueleto y en los programas de polaridad epitelial. La podocalixina‑like 1 se ha implicado en procesos asociados a la transición epitelio‑mesénquima, la migración y la invasión, y su expresión alterada se evalúa con frecuencia en estudios de progresión tumoral y fenotipos metastásicos. En el riñón, PODXL es un marcador clave de los podocitos y es relevante para la integridad de la barrera glomerular y la morfodinámica de los podocitos.

Podocalyxin-like 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PODXL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Podocalyxin-like 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PODXL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PODXL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Podocalyxin-like 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PODXL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Podocalyxin-like 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Podocalyxin-like 1 en células tumorales con expresión de PODXL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.