Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLZF: sc-400354-ACT

ZBTB16 code PLZF, un facteur de transcription à doigts de zinc portant un domaine BTB/POZ, qui gouverne les décisions de destin cellulaire en coordonnant des programmes de répression et d’activation transcriptionnelles associés à la chromatine. Dans l’hématopoïèse humaine et le développement immunitaire, PLZF contribue à réguler le maintien des progéniteurs et la spécification des lignages, notamment en influençant la différenciation des lymphocytes de type inné et l’expression de gènes sensibles aux cytokines. Les réseaux dépendants de PLZF s’entrecroisent avec le contrôle épigénétique de la prolifération et de la différenciation, reliant ce facteur à la régulation du développement et aux voies de maturation cellulaire. Une expression dysrégulée de ZBTB16/PLZF ou des réarrangements ont été associés à des programmes transcriptionnels altérés dans des contextes de maladies hématologiques, ce qui en fait un nœud utile pour étudier des phénotypes pilotés par des facteurs de transcription.

PLZF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZBTB16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLZF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZBTB16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZBTB16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLZF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZBTB16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLZF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLZF dans les cellules tumorales présentant une expression de ZBTB16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.