The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
PI-9双切口酶质粒(h): sc-404486-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PI-9 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- PI-9双切酶质粒（h）和PI-9双切酶质粒（h2）编码针对SERPINB9的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：PI-9: sc-390406，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PI-9双切口酶质粒(h) | sc-404486-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PI-9双切口酶质粒(h2) | sc-404486-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 SERPINB9 基因编码 PI-9，这是一种细胞内丝氨酸蛋白酶抑制剂，主要通过中和颗粒酶 B（granzyme B），在细胞毒性淋巴细胞相互作用过程中限制由蛋白酶驱动的细胞凋亡。PI-9 通过在细胞质中调控颗粒酶 B 的活性，在穿孔素（perforin）介导递送颗粒酶的情境下影响免疫效应通路、细胞存活程序以及蛋白稳态（proteostasis）。SERPINB9 在免疫细胞及暴露于炎症应激的组织中表达较为显著，可调节细胞对细胞毒性攻击的易感性。PI-9 水平失调与免疫逃逸改变及凋亡抗性表型相关，这些现象在与炎症相关的病理过程以及肿瘤生物学研究中均有报道。
PI-9 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 SERPINB9 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对SERPINB9内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏SERPINB9的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了SERPINB9基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。