PI 4-kinase α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406508

Panoramica

PI4KA codifica la fosfatidilinositolo 4-chinasi alfa (PI 4-chinasi α), una chinasi lipidica che genera fosfatidilinositolo 4-fosfato (PI4P), un precursore chiave dei fosfoinositidi che organizzano l’identità di membrana e la segnalazione cellulare. La PI 4-chinasi α sostiene i pool di PI4P del Golgi e della membrana plasmatica, influenzando il traffico vescicolare, la trasduzione del segnale dipendente dai fosfoinositidi e la dinamica del citoscheletro. Attraverso il suo impatto sull’omeostasi dei lipidi di membrana, PI4KA è rilevante per studi sulle risposte cellulari allo stress e sul rimodellamento dei compartimenti endomembranosi; inoltre, alterazioni del metabolismo dei fosfoinositidi sono state associate a diversi meccanismi di malattia nell’uomo, inclusi processi di neurosviluppo e oncogenici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 4-kinase α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PI4KA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PI4KA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PI4KA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PI 4-kinase α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PI4KA per lo studio della segnalazione di PI 4-kinase α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PI4KA critici per la funzione di PI 4-kinase α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PI4KA per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PI 4-kinase α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PI4KA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PI 4-kinase α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PI 4-kinase α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PI4KA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PI4KA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.