Plásmido CRISPR de Activación (h) PI 3-kinase p85β: sc-401991-ACT

PIK3R2 codifica la subunidad reguladora p85β de la fosfoinosítido 3‑quinasa (PI3K) de clase IA, un mediador central de la señalización de receptores tirosina cinasa y de insulina/IGF. Al estabilizar y modular las isoformas catalíticas p110, la PI 3‑quinasa p85β ayuda a controlar la producción de PIP3 y la actividad posterior de la vía AKT–mTOR, influyendo en el crecimiento y la supervivencia celular, el metabolismo y la dinámica del citoesqueleto. La regulación alterada de la vía PI3K está ampliamente implicada en la biología del cáncer, el neurodesarrollo y la señalización inmunitaria, lo que convierte a PIK3R2 en un nodo clave para analizar la retroalimentación de la vía y la amplitud de la señal. La expresión de PIK3R2 y sus interacciones reguladoras también son relevantes para estudios de sensibilidad a la insulina, migración y señalización de respuesta al estrés en células humanas.

PI 3-kinase p85β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PIK3R2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PI 3-kinase p85β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PIK3R2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PIK3R2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PI 3-kinase p85β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PIK3R2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PI 3-kinase p85β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PI 3-kinase p85β en células tumorales con expresión de PIK3R2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.