Plásmido CRISPR de Activación (m) PGRMC1: sc-424690-ACT

El componente 1 del receptor de progesterona asociado a membrana (PGRMC1), codificado por el gen Pgrmc1 del ratón, es una proteína asociada a membrana capaz de unirse al hemo, implicada en la señalización de esteroides, la regulación del citocromo P450 y el tráfico de membranas. Se localiza predominantemente en membranas intracelulares y participa en procesos que incluyen la homeostasis del colesterol, el transporte vesicular y la modulación de vías de señalización de receptores y quinasas que influyen en la supervivencia celular y las respuestas al estrés. PGRMC1 se ha relacionado con funciones mitocondriales y asociadas al retículo endoplásmico, y se estudia con frecuencia en contextos de remodelación metabólica, estrés oxidativo y señalización proliferativa. Se han descrito alteraciones en vías asociadas a PGRMC1 en estudios de biología tumoral, metabolismo hepático y fenotipos neurobiológicos, lo que la convierte en una diana útil para la investigación mecanística en modelos celulares de ratón.

PGRMC1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pgrmc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PGRMC1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pgrmc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pgrmc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PGRMC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pgrmc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PGRMC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PGRMC1 en células tumorales con expresión de Pgrmc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.