Plásmido CRISPR de Activación (h) PFKL: sc-402662-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) PFKL es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) PFKL incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR PFKL (h) y el plásmido de activación CRISPR PFKL (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de PFKL. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PFKL Anticuerpo (A-6): sc-393713
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) PFKL | sc-402662-ACT | 20 µg | $397.00 |
PFKL codifica la isoforma hepática de la fosfofructoquinasa-1, una enzima limitante de la velocidad que cataliza la conversión de fructosa-6-fosfato en fructosa-1,6-bisfosfato, comprometiendo la glucosa con la glucólisis. Como punto clave de control metabólico, PFKL integra la regulación alostérica por ATP, AMP, citrato y fructosa-2,6-bisfosfato para ajustar el flujo glucolítico y el flujo posterior de carbono hacia el ciclo del TCA y las vías biosintéticas. La expresión o actividad alteradas de PFKL contribuyen a la reprogramación metabólica, influyendo en la proliferación celular, el equilibrio redox y las respuestas de detección de nutrientes. La glucólisis desregulada que involucra a PFKL se ha relacionado con el metabolismo tumoral y otros trastornos caracterizados por una homeostasis energética alterada, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por el metabolismo.
PFKL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PFKL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
PFKL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PFKL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PFKL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PFKL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PFKL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PFKL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PFKL en células tumorales con expresión de PFKL silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.