PFKFB3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404532

Panoramica

PFKFB3 codifica la 6-fosfofrutto-2-chinasi/fruttosio-2,6-bisfosfatasi 3, un enzima bifunzionale che controlla i livelli intracellulari di fruttosio-2,6-bisfosfato per modulare l’attività della fosfofruttochinasi-1 e il flusso glicolitico. Nelle cellule umane, PFKFB3 sostiene una glicolisi ad alta velocità e coordina l’adattamento metabolico ai segnali dei fattori di crescita, alla disponibilità di nutrienti e alle risposte allo stress, collegando il metabolismo dei carboidrati alla progressione del ciclo cellulare e alla domanda biosintetica. La sua attività interseca programmi associati all’ipossia e agli oncogeni ed è stata studiata in contesti in cui la riprogrammazione metabolica influenza proliferazione, migrazione e segnalazione infiammatoria. Un’espressione deregolata di PFKFB3 e un controllo alterato della glicolisi sono stati riportati in molteplici modelli rilevanti per la malattia, inclusi il metabolismo tumorale e l’attivazione di cellule vascolari o immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PFKFB3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PFKFB3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PFKFB3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PFKFB3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PFKFB3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PFKFB3 per lo studio della segnalazione di PFKFB3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PFKFB3 critici per la funzione di PFKFB3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PFKFB3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PFKFB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PFKFB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PFKFB3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PFKFB3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PFKFB3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PFKFB3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PFKFB3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.