Plásmido CRISPR de Activación (h) periaxin: sc-404868-ACT

PRX codifica periaxina, una proteína enriquecida en las células de Schwann que actúa como andamiaje del citoplasma abaxonal y favorece la estabilidad de la vaina de mielina en el sistema nervioso periférico. La periaxina participa en la organización del citoesqueleto y en complejos asociados a la membrana que ayudan a mantener la arquitectura internodal, incluidas interacciones con estructuras vinculadas a distroglicano y laminina. A través de estas funciones estructurales, PRX contribuye a la comunicación axón–glía, al mantenimiento de la mielina y a la conducción nerviosa periférica. La alteración de la función de PRX se asocia con neuropatías periféricas hereditarias caracterizadas por desmielinización y deterioro de la fisiología nerviosa, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de la biología de la mielina.

periaxin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

periaxin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de periaxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de periaxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía periaxin en células tumorales con expresión de PRX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.