paxillin Plasmide Double Nickase (m): sc-422546-NIC

Il gene murino Pxn codifica la paxillina, un adattatore multidominio delle adesioni focali che coordina la segnalazione dipendente dalle integrine e il rimodellamento del citoscheletro di actina durante l’adesione, lo spreading e la migrazione cellulare. La paxillina funge da impalcatura per chinasi e regolatori di GTPasi, integrando segnali provenienti da FAK/SRC e dalle vie a valle della famiglia RHO per modulare il turnover delle adesioni focali e la meccanotrasduzione. Attraverso queste funzioni influenza il riconoscimento della matrice extracellulare, la dinamica dei lamellipodi e la polarità cellulare. Un’alterazione della segnalazione della paxillina e del rimodellamento delle adesioni focali è frequentemente implicata in cambiamenti della motilità e in fenotipi invasivi in modelli rilevanti per la patologia, rendendo Pxn un nodo utile per lo studio delle reti di segnalazione associate all’adesione.

paxillin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pxn nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pxn. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pxn. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pxn interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.