Particules Lentivirales d'Activation (m) Pax-6: sc-422119-LAC

Le gène murin Pax6 code le facteur de transcription à domaine « paired box » Pax-6, un régulateur maître du développement de l’œil, du prosencéphale et du compartiment endocrinien pancréatique, qui contrôle la spécification des lignages, le maintien des progéniteurs et la différenciation neuronale. Pax-6 se lie à des éléments promoteurs et activateurs (enhancers) afin de coordonner des programmes transcriptionnels en aval des signaux morphogènes du développement et de moduler une régulation génique dépendante de la chromatine lors de la mise en place des tissus. À l’âge adulte, Pax-6 contribue à la plasticité neuronale et à l’expression de gènes endocriniens, reliant son dosage à des voies qui gouvernent les transitions de destinée cellulaire et la stabilité des états de différenciation. Une activité PAX6 dérégulée est associée à des malformations oculaires congénitales et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude des réseaux de régulation génique du développement et du contrôle transcriptionnel pertinent pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales Pax-6 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pax6 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pax-6 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pax6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pax-6. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pax6 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.