PAO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404683

Visão geral

O SMOX humano codifica a poliamina oxidase (PAO), uma enzima peroxissomal dependente de flavina que catalisa a retroconversão oxidativa da espermina em espermidina, conectando o fluxo de poliaminas ao equilíbrio redox celular. Essa reação gera peróxido de hidrogênio e subprodutos aldeídicos, relacionando a atividade de SMOX à sinalização de estresse oxidativo, às respostas a danos no DNA e à regulação da proliferação e da diferenciação. O eixo SMOX/PAO interage com redes de biossíntese e catabolismo de poliaminas que influenciam a dinâmica da cromatina e a tradução, e sua desregulação tem sido associada na literatura à inflamação, à neurodegeneração e à remodelação metabólica relacionada ao câncer. Como um nó da homeostase de poliaminas, o SMOX é frequentemente investigado pelo seu impacto na função mitocondrial, na suscetibilidade à ferroptose e em programas transcricionais de adaptação ao estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PAO (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SMOX em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SMOX, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SMOX na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PAO.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SMOX para a investigação da sinalização de PAO, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SMOX críticos para a função PAO
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SMOX para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PAO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PAO Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SMOX. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PAO Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PAO (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SMOX para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SMOX definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.