Plásmido CRISPR de Activación (h) PAL: sc-408281-ACT

SHCBP1 codifica la proteína 1 asociada a la unión a SHC y al huso mitótico, un factor asociado a microtúbulos y al huso implicado en la progresión mitótica y la citocinesis, con funciones vinculadas a la dinámica del centrosoma y al control del ciclo celular. La actividad de SHCBP1 se ha relacionado con la señalización proliferativa aguas abajo de los adaptadores SHC e interseca con vías que coordinan la señalización por factores de crecimiento con la remodelación del citoesqueleto. Se ha informado una expresión desregulada de SHCBP1 en múltiples tipos de tumores y con frecuencia se estudia en el contexto de proliferación alterada, inestabilidad cromosómica y fenotipos invasivos. En modelos de células humanas, SHCBP1 sirve como un nodo útil para explorar mecanismos que acoplan la regulación mitótica con la señalización oncogénica y las respuestas al estrés.

PAL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SHCBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PAL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SHCBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SHCBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PAL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SHCBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PAL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PAL en células tumorales con expresión de SHCBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.