PAI-1/SERPINE1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-422287-ACT-2

O gene murino Serpine1 codifica o inibidor do ativador do plasminogênio-1 (PAI-1), uma serpin secretada que inibe os ativadores do plasminogênio do tipo tecidual e do tipo uroquinase (tPA/uPA) para limitar a geração de plasmina e, assim, regular a fibrinólise, a proteólise pericelular e a remodelação da matriz extracelular. O PAI-1 integra sinais de TGF-β, citocinas inflamatórias e vias de estresse oxidativo para influenciar a adesão celular, a migração e o reparo tecidual, com efeitos a jusante na cicatrização de feridas e na remodelação fibrótica. A expressão desregulada de Serpine1/PAI-1 está associada a fenótipos trombóticos e hemorrágicos, à inflamação metabólica relacionada à obesidade e à fibrose de órgãos, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de hemostasia, biologia vascular e patologia inflamatória crônica. A edição gênica ou a perturbação de Serpine1 em modelos murinos permite a investigação funcional do equilíbrio protease–antiprotease, da renovação da matriz e das redes de sinalização que acoplam inflamação e remodelação in vivo e em ensaios baseados em células.

PAI-1/SERPINE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Serpine1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PAI-1/SERPINE1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Serpine1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Serpine1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PAI-1/SERPINE1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Serpine1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PAI-1/SERPINE1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PAI-1/SERPINE1 em células tumorais com expressão de Serpine1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.