P2Y5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405189

Visão geral

LPAR6 (também conhecido como P2Y5) codifica um recetor acoplado à proteína G que responde ao ácido lisofosfatídico (LPA), regulando a sinalização intracelular através de proteínas G heterotriméricas. A atividade de P2Y5 influencia vias associadas a Rho/ROCK e MAPK, coordenando a remodelação do citoesqueleto, a adesão célula–célula e a motilidade de forma dependente do contexto. Este recetor está fortemente implicado na biologia da pele e do folículo piloso, onde alterações na sinalização de LPAR6 estão associadas a doenças congénitas do crescimento do cabelo e a fenótipos mais amplos de homeostase epitelial. Além disso, a sinalização lipídica mediada por LPAR6 cruza-se com processos inflamatórios e relacionados com a função de barreira, tornando-o relevante para estudos mecanísticos em queratinócitos e outros modelos epiteliais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LPAR6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LPAR6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LPAR6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LPAR6 para a investigação da sinalização de P2Y5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LPAR6 críticos para a função P2Y5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LPAR6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P2Y5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P2Y5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LPAR6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P2Y5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LPAR6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LPAR6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.