P2Y12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417999

Visão geral

P2RY12 codifica o receptor purinérgico P2Y12, um GPCR acoplado à proteína Gi que detecta ADP extracelular para suprimir a sinalização de AMPc e coordenar a ativação e agregação plaquetárias, bem como a estabilização do trombo, por meio de vias downstream de PI3K/AKT e de sinalização por integrinas. Para além da hemostasia, o P2Y12 é um marcador característico da microglia homeostática e modula a quimiotaxia, a motilidade dos prolongamentos e a vigilância neuroimune em resposta a nucleotídeos. Alterações na atividade ou na expressão de P2RY12 têm sido associadas à reatividade plaquetária anormal e a mudanças de estado microglial observadas em contextos neuroinflamatórios e neurodegenerativos. Essas características tornam o P2RY12 um alvo útil para dissecar a sinalização dirigida por nucleotídeos, a comunicação célula–célula e o crosstalk imune–vascular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO P2Y12 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene P2RY12 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do P2RY12, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do P2RY12 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína P2Y12.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de P2RY12 para a investigação da sinalização de P2Y12, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) P2RY12 críticos para a função P2Y12
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos P2RY12 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo P2Y12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo P2Y12 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus P2RY12. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo P2Y12 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR P2Y12 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia P2RY12 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo P2RY12 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.