P-Selectin/CD62P/SELP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400441-ACT

SELP codifica a P-selectina (CD62P), um recetor de adesão induzível armazenado nos grânulos α das plaquetas e nos corpos de Weibel–Palade do endotélio, sendo rapidamente exposta na superfície celular após ativação. A P-selectina de superfície liga-se à PSGL-1 nos leucócitos para iniciar a ancoragem e o rolamento, coordenando o recrutamento precoce de leucócitos durante a inflamação e ligando a lesão vascular a respostas tromboinflamatórias. Ao regular as interações plaqueta–leucócito e endotélio–leucócito, SELP influencia a sinalização associada à coagulação, a ativação endotelial mediada por citocinas e a remodelação do microambiente vascular. A expressão e a atividade desreguladas da P-selectina estão associadas a patologia vascular inflamatória, a processos relacionados com trombose e a interações plaquetárias associadas a tumores que afetam a biologia da metastização.

P-Selectin/CD62P/SELP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

P-Selectin/CD62P/SELP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de P-Selectin/CD62P/SELP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de P-Selectin/CD62P/SELP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via P-Selectin/CD62P/SELP em células tumorais com expressão de SELP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.