Olfr713 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435112-ACT

Olfr713 (camundongo) codifica um receptor olfatório pertencente à superfamília de GPCRs classe A do tipo rodopsina, que contribui para a detecção de odorantes e para a transdução de sinais quimiossensoriais em neurônios sensoriais olfatórios. Após a ligação do ligante, os receptores olfatórios se acoplam a proteínas G heterotriméricas para regular a atividade da adenilil ciclase, a produção de cAMP, a abertura de canais regulados por nucleotídeos cíclicos e a despolarização neuronal a jusante. A expressão e a função de Olfr713 são relevantes para estudos de identidade de neurônios sensoriais, tráfego de receptores e mecanismos de dessensibilização de GPCRs que moldam a codificação olfatória. A desregulação de vias de receptores olfatórios é frequentemente usada como uma leitura em nível de sistema em modelos de neuroinflamação, neurodegeneração e exposição ambiental, nos quais a sinalização quimiossensorial alterada pode refletir mudanças mais amplas no estado neuronal.

Olfr713 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Olfr713 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Olfr713 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Olfr713 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Olfr713, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Olfr713. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Olfr713 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Olfr713 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Olfr713 em células tumorais com expressão de Olfr713 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.