Olfr666 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435166-ACT

Olfr666 codifica um receptor olfatório de camundongo pertencente à superfamília de GPCRs classe A do tipo rodopsina, principalmente associado à detecção quimiossensorial e à transdução de sinais desencadeada por odorantes. Após a ligação do ligante, os receptores olfatórios geralmente se acoplam a cascatas de sinalização por proteína G que elevam o cAMP intracelular e modulam a atividade de canais iônicos, moldando a excitabilidade neuronal e a codificação sensorial. Embora os receptores olfatórios sejam mais bem caracterizados no epitélio olfatório, membros dessa família gênica também são relatados em alguns tecidos não olfatórios, sugerindo funções mais amplas na comunicação celular mediada por GPCRs. Alterações na expressão de receptores olfatórios e na dinâmica de sinalização de GPCRs são frequentemente usadas como leituras em modelos de disfunção sensorial e como marcadores moleculares em estudos de desenvolvimento neural e de regulação transcricional específica de tecido.

Olfr666 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Olfr666 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Olfr666 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Olfr666 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Olfr666, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Olfr666. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Olfr666 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Olfr666 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Olfr666 em células tumorais com expressão de Olfr666 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.