NPY2-R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417895-ACT

NPY2R codifica o recetor humano do neuropeptídeo Y tipo Y2 (NPY2-R), um GPCR acoplado a Gi/o que se liga ao neuropeptídeo Y e ao péptido YY para modular a sinalização de cAMP, a atividade de canais iónicos e a dinâmica da via MAPK/ERK a jusante. O NPY2-R está amplamente implicado na regulação neuroendócrina, moldando a transmissão sináptica, a responsividade ao stress e os circuitos relacionados com o apetite, e também contribui para a fisiologia vascular e gastrointestinal. Por meio da neurotransmissão inibitória e do controlo pré-sináptico da libertação de péptidos, o NPY2R influencia a excitabilidade celular e a homeostase metabólica. A desregulação da sinalização de NPY2R tem sido associada a fenótipos relevantes para o equilíbrio energético, vias de humor e stress, e processos inflamatórios ou autonómicos, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos em modelos celulares neuronais e periféricos.

NPY2-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NPY2R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NPY2-R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NPY2R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NPY2R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NPY2-R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NPY2R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NPY2-R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NPY2-R em células tumorais com expressão de NPY2R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.