Plásmido Doble Nickase (h) NPC1: sc-403252-NIC

NPC1 codifica la proteína de la enfermedad de Niemann-Pick tipo C1, un transportador de membrana de endosomas tardíos/lisosomas que coordina el tráfico intracelular de colesterol y glicolípidos. Al asociarse con NPC2 y regular la salida de esteroles desde los lisosomas hacia otras membranas, NPC1 contribuye a la homeostasis lipídica, la composición de membrana y la señalización posterior vinculada a la dinámica del sistema endosoma–lisosoma y la autofagia. La alteración de la función de NPC1 provoca acumulación lisosomal de lípidos y fenotipos de estrés celular, y sus variantes se asocian con la enfermedad de Niemann-Pick tipo C y con investigación más amplia relacionada con neurodegeneración y metabolismo. Por ello, NPC1 se estudia extensamente en vías que gobiernan la función lisosomal, los sitios de contacto entre orgánulos y la señalización dependiente del colesterol.

NPC1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NPC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NPC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NPC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NPC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.