Plásmido Doble Nickase (h) Nopp140: sc-402907-NIC

NOLC1 codifica la fosfoproteína nucleolar y de cuerpos enrollados 1 (Nopp140), una proteína nucleolar altamente fosforilada que se desplaza entre el nucléolo y los cuerpos de Cajal para apoyar la biogénesis de ribosomas y la dinámica de las RNP nucleolares pequeñas y de las RNP específicas de los cuerpos de Cajal. Nopp140 interactúa con componentes centrales de la maquinaria de transcripción y procesamiento del rRNA y ayuda a organizar la arquitectura nucleolar, vinculando su función con la actividad de la ARN polimerasa I, la maduración del pre-rRNA y las respuestas al estrés nucleolar. La alteración de NOLC1 puede modificar el procesamiento del rRNA, la integridad del nucléolo y la progresión del ciclo celular, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos del control del crecimiento y la señalización de estrés. Dado que la disfunción nucleolar es una característica común de diversos estados fisiopatológicos, NOLC1 se examina con frecuencia como marcador y regulador de la homeostasis nucleolar en modelos celulares relevantes para enfermedad.

Nopp140 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NOLC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NOLC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NOLC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NOLC1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.