nm23-H1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401221-NIC

NME1 codifica nm23-H1, una nucleoside difosfato chinasi espressa ubiquitariamente che regola l’omeostasi dei nucleotidi cellulari e partecipa alla trasduzione del segnale, al rimodellamento del citoscheletro e al traffico di membrana. Oltre alla sua attività enzimatica, nm23-H1 è stata collegata al controllo della motilità cellulare, della differenziazione e delle risposte allo stress attraverso interazioni con vie delle piccole GTPasi e reti di chinasi. Alterazioni dell’espressione e della funzione di NME1 sono state associate a cambiamenti del comportamento invasivo e del potenziale metastatico in molteplici contesti tumorali, ed è spesso studiato in relazione a fenotipi associati alla proliferazione e al danno al DNA. Queste caratteristiche rendono NME1 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di migrazione, la stabilità del genoma e il cross-talk tra vie di segnalazione nelle cellule umane.

nm23-H1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NME1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NME1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NME1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NME1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.