Nkx-6.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401997

Visão geral

NKX6-1 codifica o fator de transcrição homeobox Nkx-6.1, um regulador-chave da especificação da linhagem endócrina pancreática e da maturação das células β. Nkx-6.1 coordena programas transcricionais que controlam a secreção de insulina, o acoplamento metabólico estimulado por glicose e a manutenção da identidade das células β por meio de redes que se cruzam com a regulação gênica associada a PDX1, NEUROD1 e MAFA. Alterações na expressão ou na atividade de NKX6-1 têm sido associadas a prejuízo da função das células β e à desregulação da homeostase da glicose, tornando-o relevante para estudos de mecanismos relacionados ao diabetes e ao desenvolvimento endócrino. Além da biologia do pâncreas, Nkx-6.1 é usado como marcador e como nó funcional em modelos de diferenciação que investigam o comprometimento de linhagem e o controle transcricional.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NKX6-1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NKX6-1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NKX6-1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Nkx-6.1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NKX6-1 para a investigação da sinalização de Nkx-6.1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NKX6-1 críticos para a função Nkx-6.1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NKX6-1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Nkx-6.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Nkx-6.1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NKX6-1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Nkx-6.1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Nkx-6.1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NKX6-1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NKX6-1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.