Plásmido Doble Nickase (h) Nkx-2.3: sc-406709-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Nkx-2.3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nkx-2.3 (h) y el plásmido de doble nickasa Nkx-2.3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NKX2-3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nkx-2.3 Anticuerpo (4F4): sc-517182
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Nkx-2.3 | sc-406709-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Nkx-2.3 | sc-406709-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NKX2-3 codifica el factor de transcripción homeobox Nkx-2.3, un regulador nuclear de unión al ADN que determina el patrón de los tejidos derivados del endodermo y ayuda a mantener la identidad del intestino y de los órganos linfoides. Al controlar programas transcripcionales específicos de linaje, Nkx-2.3 influye en la diferenciación epitelial, la organización inmunitaria de la mucosa y el desarrollo vascular regional, integrándose en redes de señalización del desarrollo más amplias que dan forma a la homeostasis intestinal. La alteración de la actividad de NKX2-3 se ha asociado con una expresión génica desregulada en la inflamación intestinal y con fenotipos relacionados con el sistema inmunitario, lo que lo convierte en un nodo relevante para estudiar mecanismos que conectan reguladores del desarrollo con la inmunidad mucosal. Sus dianas transcripcionales y su actividad dependiente del contexto respaldan la investigación de circuitos de regulación génica en el epitelio intestinal y en los compartimentos estromales e inmunitarios.
Nkx-2.3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NKX2-3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NKX2-3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NKX2-3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NKX2-3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.