Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404780-NIC

CHRNE codifica a subunidade épsilon do recetor nicotínico de acetilcolina (nAChR) do tipo muscular, um canal catiónico regulado por ligando que é essencial para a transmissão sináptica rápida na junção neuromuscular. A incorporação da subunidade épsilon no pentâmero do nAChR adulto sustenta a abertura do canal dependente de acetilcolina, o influxo de sódio e a despolarização da placa motora que inicia o acoplamento excitação–contração. A função de CHRNE integra-se com a sinalização agrina–LRP4–MuSK, com a depuração do neurotransmissor regulada pela acetilcolinesterase e com a agregação e renovação do recetor dependentes da atividade na membrana pós-sináptica. Variantes patogénicas de CHRNE estão associadas a síndromes miasténicas congénitas caracterizadas por transmissão neuromuscular comprometida e por alteração da expressão do recetor ou da cinética de abertura/fecho (gating).

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHRNE em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHRNE. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHRNE. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHRNE interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.