nestin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400156-LAC

Il gene umano **NES** codifica la **nestina**, una proteina dei filamenti intermedi di classe VI che rappresenta un marcatore delle cellule staminali/progenitrici neurali e di altri stati cellulari proliferativi e indifferenziati. La nestina contribuisce all’organizzazione del citoscheletro e alla meccanica cellulare durante la mitosi, la migrazione e l’impegno di linea differenziativa, e interagisce funzionalmente con i programmi di rimodellamento del citoscheletro che si coordinano con la segnalazione dei fattori di crescita. L’espressione di **NES** è regolata in modo dinamico durante lo sviluppo e viene riindotta durante la riparazione dei tessuti e le risposte allo stress cellulare, riflettendo cambiamenti in programmi trascrizionali di tipo progenitore. Un’espressione disregolata della nestina è frequentemente associata alla plasticità delle cellule tumorali e a fenotipi invasivi, rendendola un utile indicatore molecolare negli studi su staminalità, differenziamento e biologia del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale nestin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NES in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale nestin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NES, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di nestin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NES e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.