N-Myc CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400253-ACT

MYCNはヒトN-Myc転写因子をコードしており、これは塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）-ロイシンジッパー型タンパク質で、MAXとヘテロ二量体を形成してE-box調節配列に結合し、広範な遺伝子発現プログラムを統合的に制御します。N-Mycは、MYC/MAXネットワーク活性との連携やクロマチン関連コファクターのリクルートを介して、細胞周期の進行、リボソーム生合成、代謝、DNA複製ストレス応答、分化状態の調節に関与します。MYCN発現の異常は、複数の腫瘍コンテキストにおいて増殖能や系譜プログラムの変化と関連しており、がん性転写回路を研究するための標的（ノード）として広く用いられています。RNAポリメラーゼIIによる転写、クロマチンアクセシビリティ、ならびに増殖因子シグナル伝達経路に対する下流作用は、機序研究における測定可能な指標を提供します。

N-Myc CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYCNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

N-Myc CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYCN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYCN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性N-Mycの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYCN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるN-Myc依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYCN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるN-Myc経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。