MuSK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402534-ACT

MUSK codifica a quinase específica do músculo (MuSK), uma tirosina quinase receptora essencial para o desenvolvimento e a manutenção da junção neuromuscular (JNM). Após a estimulação por agrina–LRP4, a sinalização de MuSK coordena o agrupamento (clustering) dos receptores de acetilcolina (AChR) e a diferenciação pós-sináptica por meio de vias a jusante, incluindo o arcabouço associado a Dok7 e rapsina e a remodelação do citoesqueleto. Esse programa sustenta a estabilização da sinapse, a inervação das fibras musculares e a plasticidade sináptica dependente de atividade. A desregulação da sinalização de MuSK e a instabilidade da JNM estão implicadas em distúrbios neuromusculares, incluindo síndromes miastênicas congênitas e subtipos de miastenia gravis autoimune.

MuSK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUSK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MuSK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUSK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUSK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MuSK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUSK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MuSK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MuSK em células tumorais com expressão de MUSK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.