Mucin 1/MUC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416876-ACT

MUC1 codifica a mucina 1, uma mucina transmembranar altamente glicosilada que contribui para a função de barreira epitelial e para a organização da superfície apical por meio do seu domínio extracelular, ao mesmo tempo que transmite sinais através da sua cauda citoplasmática. A MUC1 participa em interações célula–célula e célula–matriz e integra vias que regulam a sinalização por receptores tirosina-quinase, a transcrição dependente de β-catenina e as respostas ao stress inflamatório. Alterações na expressão, localização ou glicoformas da MUC1 estão associadas à desregulação epitelial e são frequentemente estudadas em contextos que envolvem sinalização oncogénica, invasão e modulação imunitária. Como glicoproteína ancorada à membrana, a MUC1 também é amplamente utilizada como modelo para investigar a biologia das mucinas, interações de ligantes dependentes de glicosilação e a remodelação do surfaceoma.

Mucin 1/MUC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mucin 1/MUC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mucin 1/MUC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mucin 1/MUC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mucin 1/MUC1 em células tumorais com expressão de MUC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.