mPRε Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408586-ACT

PAQR9 codifica o recetor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), um membro da família de recetores de progestinas e adipoQ, implicado na sinalização esteroide não clássica na membrana plasmática. O mPRε tem sido associado a uma transdução de sinal rápida desencadeada pela progesterona, capaz de influenciar vias de segundos mensageiros, incluindo a modulação da dinâmica de cAMP/PKA e MAPK/ERK, com efeitos a jusante na proliferação celular, diferenciação e respostas ao stress. Em tecidos humanos, a expressão de PAQR9 foi observada em contextos responsivos a hormonas, sustentando papéis na biologia reprodutiva e numa regulação endócrina mais ampla. Vias de sinalização de progestinas desreguladas que envolvem recetores da família PAQR são relevantes para estudos mecanísticos de fenótipos induzidos por hormonas na biologia do cancro, na homeostase metabólica e na função neuroendócrina.

mPRε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAQR9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mPRε O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAQR9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAQR9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mPRε. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAQR9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mPRε no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mPRε em células tumorais com expressão de PAQR9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.