MMP9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421679-ACT

O gene murino **Mmp9** codifica a metaloproteinase de matriz-9 (MMP9), uma endopeptidase secretada dependente de zinco que degrada componentes da matriz extracelular, como a gelatina e o colágeno tipo IV. A MMP9 regula a remodelação tecidual, a migração de leucócitos, a ativação do programa angiogênico e as interações epitélio–mesênquima, sendo induzida a jusante de vias de sinalização inflamatória, incluindo NF-κB, AP-1, MAPK e redes de citocinas/quimiocinas. Ao remodelar a matriz pericelular e liberar ou ativar fatores de crescimento, a MMP9 influencia a reparação de feridas e a função de barreira, bem como a comunicação entre componentes do microambiente. A atividade desregulada da MMP9 está implicada em processos inflamatórios e fibróticos e é amplamente estudada como moduladora da dinâmica do microambiente tumoral e da remodelação associada à metástase em modelos murinos de doença.

MMP9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mmp9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mmp9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mmp9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mmp9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP9 em células tumorais com expressão de Mmp9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.