Plásmido CRISPR de Activación (h) MMP-8: sc-402089-ACT

El gen humano **MMP8** codifica la metaloproteinasa de matriz 8 (MMP-8), una endopeptidasa secretada dependiente de zinc que escinde colágenos fibrilares y otros sustratos de la matriz extracelular para regular la remodelación tisular. La actividad de MMP-8 se integra con la señalización inflamatoria y el reclutamiento de leucocitos, y se relaciona con la organización de la matriz extracelular, el procesamiento de quimiocinas y los procesos de reparación de heridas. La expresión desregulada de MMP-8 o el desequilibrio proteolítico se han asociado con microambientes inflamatorios crónicos y con una dinámica estromal alterada en contextos como la enfermedad periodontal, la artritis y la remodelación asociada a tumores. Como proteasa vinculada a biomarcadores en las respuestas inmunitarias innatas, MMP-8 se estudia con frecuencia por sus efectos sobre la migración celular, la integridad de las barreras y el recambio de la matriz.

MMP-8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MMP8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MMP-8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MMP8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MMP8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MMP-8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MMP8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MMP-8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MMP-8 en células tumorales con expresión de MMP8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.