MMP-8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402089-ACT

O gene humano MMP8 codifica a metaloproteinase de matriz 8 (MMP-8), uma endopeptidase secretada dependente de zinco que cliva colágenos fibrilares e outros substratos da matriz extracelular para regular a remodelação tecidual. A atividade da MMP-8 integra-se à sinalização inflamatória e ao recrutamento de leucócitos, interseccionando-se com a organização da matriz extracelular, o processamento de quimiocinas e os processos de reparo de feridas. A desregulação da expressão da MMP-8 ou do equilíbrio proteolítico tem sido associada a microambientes inflamatórios crônicos e a dinâmicas estromais alteradas em contextos como doença periodontal, artrite e remodelação associada a tumores. Como uma protease ligada a biomarcadores em respostas imunes inatas, a MMP-8 é frequentemente estudada por seus efeitos sobre migração celular, integridade de barreira e renovação da matriz.

MMP-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-8 em células tumorais com expressão de MMP8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.