MMP-12 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401853-ACT

O MMP12 humano codifica a metaloproteinase de matriz 12 (MMP-12), uma endopeptidase dependente de zinco que degrada componentes da matriz extracelular, como a elastina, e modula o microambiente proteolítico pericelular. A atividade da MMP-12 se cruza com processos de remodelação da matriz extracelular, sinalização inflamatória e programas de migração celular, influenciando a arquitetura tecidual e o tráfego de leucócitos. A expressão desregulada de MMP-12 tem sido associada a condições inflamatórias crônicas e à remodelação relacionada à fibrose, e é frequentemente estudada no contexto da dinâmica do microambiente tumoral, da renovação da matriz associada à invasão e de patologias mediadas por macrófagos.

MMP-12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP12 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMP-12 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP12 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP12, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMP-12. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP12 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMP-12 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMP-12 em células tumorais com expressão de MMP12 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.