MKP-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405727-ACT

DUSP16 codifica a fosfatase 7 de quinases ativadas por mitógenos (MKP-7), uma fosfatase de dupla especificidade que atenua a sinalização de MAPK ao desfosforilar quinases ativadas por estresse, com preferência relatada pelas vias de JNK e p38. Por meio do controle por feedback negativo das cascatas de MAPK, a MKP-7 influencia programas transcricionais dependentes de estímulo que regulam proliferação, diferenciação e apoptose. A atividade desregulada de DUSP16 tem sido associada na literatura a alterações na sinalização inflamatória e à remodelação, em tumores, da rede de MAPK, tornando-o um nó útil para estudar a homeostase da via. Como regulador citosólico de respostas dirigidas por quinases, a MKP-7 é frequentemente investigada em contextos de sinalização por citocinas, adaptação ao estresse celular e crosstalk entre vias relacionadas à imunidade.

MKP-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DUSP16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MKP-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DUSP16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DUSP16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MKP-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DUSP16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MKP-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MKP-7 em células tumorais com expressão de DUSP16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.