Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mex3c: sc-408878-ACT

Le gène humain MEX3C code Mex3c, une protéine de liaison à l’ARN contenant des domaines KH et un motif doigt RING de type C3H1, qui soutient la régulation génique post‑transcriptionnelle via une liaison sélective aux ARNm, leur localisation et le contrôle de leur stabilité. Mex3c participe à des réseaux du métabolisme de l’ARN qui influencent les programmes de traduction et la différenciation cellulaire, établissant un lien avec la protéostasie et l’adaptation des voies de signalisation lorsque les états métaboliques changent. Parmi les connexions fonctionnelles rapportées figurent la régulation du renouvellement des ARNm et des processus associés à l’ubiquitine, qui modèlent la croissance cellulaire et les réponses au stress. Une expression dérégulée de MEX3C a été observée dans des signatures transcriptionnelles pertinentes pour des maladies, ce qui motive son étude dans les mécanismes sous‑jacents aux dysfonctionnements métaboliques et au remodelage de la régulation de l’ARN associé au cancer.

Mex3c Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MEX3C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mex3c Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MEX3C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MEX3C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mex3c. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MEX3C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mex3c au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mex3c dans les cellules tumorales présentant une expression de MEX3C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.