MEF-2C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416594-ACT

MEF2C codifica o fator de transcrição humano MEF-2C, um regulador da família MADS-box/MEF2 que integra a sinalização dependente de cálcio ao controle da cromatina e da transcrição. O MEF-2C coordena programas de expressão gênica envolvidos na diferenciação muscular, no desenvolvimento neuronal, na remodelação sináptica e na especificação de linhagens de células imunes por meio de vias como CaMK/Calcineurina–NFAT, MAPK e interações com HDACs de classe IIa. No núcleo, o MEF-2C liga-se a elementos de resposta MEF2 para modular a transcrição dependente de atividade e transições de estado celular em múltiplos tecidos. A desregulação da expressão de MEF2C ou de seus circuitos regulatórios tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento, alteração do equilíbrio excitatório/inibitório e reprogramação transcricional associada ao câncer, sustentando seu uso como um nó para estudos mecanísticos.

MEF-2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MEF2C sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEF-2C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MEF2C em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MEF2C, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEF-2C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MEF2C nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEF-2C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEF-2C em células tumorais com expressão de MEF2C silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.