Plásmido CRISPR de Activación (h) Med4: sc-406004-ACT

El gen humano **MED4** codifica Med4, una subunidad conservada del complejo Mediator que conecta factores de transcripción específicos de secuencia con la ARN polimerasa II para coordinar el inicio de la transcripción. Med4 contribuye a programas transcripcionales que regulan la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la expresión génica sensible al estrés mediante una regulación amplia de la transcripción dependiente de la Pol II. La alteración de subunidades de Mediator puede modificar la producción transcripcional global, con efectos posteriores sobre la proliferación, la estabilidad del genoma y las redes reguladoras específicas de linaje, que con frecuencia están alteradas en el cáncer y otros trastornos asociados a desregulación transcripcional. Como nodo del control transcripcional, **MED4** es útil para estudiar cómo la arquitectura de Mediator ajusta la activación de promotores y la expresión génica dependiente de señales.

Med4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MED4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Med4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MED4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MED4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Med4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MED4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Med4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Med4 en células tumorales con expresión de MED4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.