MCT9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409073-ACT

SLC16A9 codifica o transportador de monocarboxilatos 9 (MCT9), um transportador de membrana da família SLC16 (solute carrier 16), implicado no movimento transmembranar de pequenos ácidos orgânicos e metabólitos relacionados. O MCT9 contribui para a homeostase metabólica celular ao influenciar a disponibilidade de substratos para a oxidação mitocondrial, o equilíbrio redox e processos mais amplos de deteção de nutrientes. Padrões de expressão e associações genéticas ligam o SLC16A9 à regulação sistémica de metabólitos, incluindo o manuseamento do urato e a fisiologia de transporte associada ao rim. Como resultado, o SLC16A9 é frequentemente estudado no contexto de características e perturbações metabólicas em que alterações no fluxo de metabólitos e na atividade de transportadores moldam a função celular e tecidular.

MCT9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC16A9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MCT9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC16A9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC16A9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MCT9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC16A9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MCT9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MCT9 em células tumorais com expressão de SLC16A9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.