Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MCT4 Double Nickase Plasmid (h): sc-418517-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MCT4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MCT4 Double-Nickase-Plasmid (h) und MCT4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC16A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MCT4: sc-376140
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MCT4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418517-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCT4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418517-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC16A3 kodiert den Monocarboxylat-Transporter 4 (MCT4), einen H+-gekoppelten Symporter in der Plasmamembran, der Laktat und andere Monocarboxylate aus der Zelle exportiert, um den intrazellulären pH-Wert zu regulieren und den glykolytischen Stoffwechsel aufrechtzuerhalten. MCT4 wirkt an der metabolischen Umprogrammierung mit, indem es eine schnelle Regeneration von NAD+ unterstützt und Säurestress begrenzt, und ist in hypoxie- und HIF-1-assoziierte Transkriptionsprogramme eingebunden. Durch den Laktat-Export prägt seine Aktivität das extrazelluläre Mikromilieu und beeinflusst Redox-Gleichgewicht, Nährstoffaufteilung und die metabolische Kopplung zwischen Zellen. Eine dysregulierte Expression von SLC16A3/MCT4 ist mit Zuständen hoher Glykolyse assoziiert und wird mit dem Krebsstoffwechsel sowie anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die mit verändertem Laktat-Handling und gestörter pH-Homöostase zusammenhängen.
MCT4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC16A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC16A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC16A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC16A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.