MBNL3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406573

Descripción general

MBNL3 (regulador del empalme tipo muscleblind 3) es una proteína de unión a ARN que reconoce motivos YGCY en pre-ARNm para controlar el empalme alternativo, la estabilidad del ARNm y su localización. Participa en programas de regulación génica posranscripcional que modelan las transiciones de estado celular, incluidas decisiones de empalme asociadas a la diferenciación y la selección de isoformas de transcritos específicas de tejido. Las proteínas de la familia MBNL son nodos centrales en redes de procesamiento de ARN vinculadas a la organización del citoesqueleto, la salida de señalización y la remodelación metabólica mediante regulación dependiente de isoformas. La desregulación del empalme mediado por MBNL se ha implicado en mecanismos de enfermedad neuromuscular impulsados por toxicidad de ARN y en perturbaciones más amplias del empalme a nivel de todo el transcriptoma observadas en contextos del desarrollo y asociados al cáncer.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MBNL3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MBNL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MBNL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MBNL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MBNL3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MBNL3 para la investigación de la señalización de MBNL3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MBNL3 críticos para la función de MBNL3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MBNL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MBNL3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MBNL3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MBNL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MBNL3 (h) y el plásmido HDR MBNL3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MBNL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MBNL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.