MARCO Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402692-ACT

O MARCO humano (receptor de macrófagos com estrutura colagenosa) é um receptor “scavenger” de classe A, expresso predominantemente por macrófagos e por subconjuntos especializados de células dendríticas, nos quais medeia a ligação e a internalização de um amplo espectro de ligantes polianiônicos, incluindo componentes bacterianos e partículas ambientais. Ao promover a fagocitose não opsonizada e a captação de partículas, o MARCO contribui para a vigilância imune inata, o processamento de antígenos e a regulação da sinalização inflamatória a jusante de vias de reconhecimento de padrões. Alterações na expressão ou na atividade do MARCO têm sido associadas à ativação desregulada de células mieloides e à inflamação tecidual, e ele é frequentemente estudado no contexto de respostas imunes pulmonares, biologia de infecções e fenótipos de macrófagos associados a tumores. Como receptor de superfície que molda as interações entre células mieloides e o microambiente, o MARCO é relevante para investigar interações hospedeiro–patógeno, o tráfego de células imunes e o remodelamento inflamatório.

MARCO O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MARCO sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MARCO O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MARCO em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MARCO, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MARCO. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MARCO nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MARCO no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MARCO em células tumorais com expressão de MARCO silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.