MAPKAPK-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401158-ACT

MAPKAPK2 kodiert die MAPK-aktivierte Proteinkinase 2 (MAPKAPK-2), eine Serin/Threonin-Kinase, die als zentraler Effektor des p38-MAPK-Stressantwort-Signalwegs fungiert. Nach Aktivierung durch MAPK14/p38 phosphoryliert MAPKAPK-2 Substrate wie HSPB1 sowie Komponenten der mRNA-Stabilität und der Translationskontrolle und verknüpft damit Umweltstress mit zytoskelettalem Remodeling und Programmen der Expression entzündungsrelevanter Gene. Diese Signalachse reguliert die Zytokinproduktion und angeborene Immunantworten über posttranskriptionelle Kontrollmechanismen und greift unter genotoxischem oder oxidativem Stress in Zellzyklus-Checkpoints und Apoptose ein. Eine dysregulierte MAPKAPK-2-Aktivität wurde mit chronisch-entzündlichen Phänotypen und der Biologie stressassoziierter Erkrankungen in Verbindung gebracht und macht MAPKAPK-2 zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien der signalgetriebenen transkriptionellen und posttranskriptionellen Regulation.

MAPKAPK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAPKAPK2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAPKAPK-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAPKAPK2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAPKAPK2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAPKAPK-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAPKAPK2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAPKAPK-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAPKAPK-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAPKAPK2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.