Particules Lentivirales d'Activation (m) MAGE-L2: sc-424255-LAC

Magel2 code MAGE-L2, un membre de la famille des gènes d’antigènes du mélanome (MAGE), jouant des rôles importants dans la biologie hypothalamique et neuronale chez la souris. MAGE-L2 participe à la régulation, dépendante de l’ubiquitine, du trafic et de la stabilité des protéines, notamment en modulant le tri endosomal et le renouvellement des récepteurs via des interactions avec des complexes de ligases E3 de l’ubiquitine. Ces processus influencent la signalisation neuroendocrine, les circuits circadiens et liés à l’alimentation, ainsi que des voies de transport intracellulaire essentielles à la fonction neuronale. Une altération de l’activité de MAGEL2 est associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et métaboliques et est largement étudiée dans le contexte de troubles syndromiques affectant la fonction hypothalamique.

Les particules d'activation lentivirales MAGE-L2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Magel2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MAGE-L2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Magel2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MAGE-L2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Magel2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.