MAGE-C1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403336

Panoramica

MAGEC1 codifica MAGE-C1, un antigene cancro-testis della famiglia MAGE con espressione limitata nei tessuti normali dell’adulto e frequentemente sovraregolato nelle cellule maligne. MAGE-C1 è implicato nella regolazione dell’omeostasi proteica tramite interazioni con complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina, influenzando il turnover proteasomiale dipendente dall’ubiquitinazione e la segnalazione della risposta allo stress. L’espressione aberrante è stata associata a programmi di sopravvivenza delle cellule tumorali, alterazioni dell’apoptosi e modulazione delle vie di riconoscimento immunitario. In quanto marcatore associato alla linea cellulare e al tumore, MAGE-C1 è comunemente studiato nel contesto della segnalazione oncogenica, della biologia della presentazione dell’antigene e dei meccanismi alla base dell’adattamento cellulare allo stress proteotossico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAGE-C1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAGEC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAGEC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAGEC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAGE-C1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAGEC1 per lo studio della segnalazione di MAGE-C1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAGEC1 critici per la funzione di MAGE-C1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAGEC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAGE-C1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAGE-C1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAGEC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAGE-C1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAGE-C1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAGEC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAGEC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.